КОМПЛЕКСНЫЙ ПОДХОД ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ОКСИДАЗНОЙ И ПЕРОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ТВЕРДОФАЗНОЙ КУЛЬТУРЫ PLEUROTUS OSTREATUS HK-35 - Елена Михайловна Кравченко; Светлана Ивановна Демченко; Иван Дмитриевич Одарюк (Химия растительного сырья, 2025)
Цель работы – разработка методики определения лакказной и пероксидазной активности грибных и растительных экстрактов. Для подбора оптимальных условий и получения кинетических данных процесса окисления субстратов-маркеров с помощью спектрофотометрического и хемилюминесцентного методов использовали модельные ферменты – лакказу из Trametes versicolor (Трутовика разноцветного) и пероксидазу из Armoracia rusticana (Хрена обыкновенного). Апробацию разработанного подхода при определении лакказной и пероксидазной активности проводили на белковой смеси, выделенной из водного экстракта мицелиально-субстратного комплекса Pleurotus ostreatus (Вёшенки обыкновенной) HK-35.Использование субстратов-маркеров разной природы (гетероциклических соединений, ароматических аминов, фенолов) повышает надежность определения активности с учетом различной субстратной специфичности ферментов природных объектов. Применение хемилюминесцентного метода для анализа ферментативной активности позволяет работать с мутными и интенсивно окрашенными пробами, затрудняющими спектрофотометрию. В отличие от традиционных методик на основе люминол-зависимой хемилюминесценции в присутствии пероксидазы в работе исследовалось свечение, возникающее при окислении многоатомных фенолов.Все использованные субстраты, за исключением фенола, окисляются в присутствии внеклеточных ферментов P. оstreatus HK-35, однако их активность по сравнению с модельными очень мала. Окисление флороглюцина в присутствии внеклеточных ферментов P. оstreatus HK-35, так же, как и в присутствии модельных ферментов, сопровождается хемилюминесценцией.