ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА ОСАЖДЕНИЯ БЕЛКА АЦЕТОНОМ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ
УДК 577.151: 577.13
Аннотация
Фенольные соединения растительного происхождения широко используются во многих областях медицины и сельского хозяйства. Изучение механизмов их образования и накопления представляет собой сложную задачу и включает определение активности ключевых ферментов их синтеза, одним из которых является шикиматдегидрогеназа. При этом выделение белков и ферментов из растительного сырья осложнено присутствием фенольных соединений и пигментов. Целью исследования было изучение применимости метода ацетонового осаждения белка из грубых экстрактов листьев облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.) и свидины шелковистой (Cornus sericea L.) для определения активности ферментов на примере шикиматдегидрогеназы. Объектом исследования были листья облепихи крушиновидной (H. rhamnoides) и свидины шелковистой (C. sericea). Выделение белка из грубого экстракта проводили охлажденным ацетоном с различным насыщением и трехкратной отмывкой осадка, после чего он растворялся в буфере. Активность шикиматдегидрогеназы определяли при рН=10.0 и выражали в нкат на мг белка. Были выделены фракции белка с различной активностью шикиматдегидрогеназы из листьев облепихи крушиновидной (H. rhamnoides) и свидины шелковистой (C. sericea). Показано, что фракция белка, полученная при соотношении 1 : 1.5 (экстракт : ацетон, 60% насыщения), наиболее удобна в работе, имеет высокую активность фермента и не содержит окрашенных примесей. Данный способ выделения и предварительной очистки белка является быстрым, требует малого количества образца и подходит для скрининговых исследований активности различных ферментов в лекарственных растениях.
Скачивания
Metrics
Литература
Chalker-Scott L., Fuchigami L.H. Low temperature stress physiology in crops. CRC press, 2018, pp. 67–80. DOI: 10.1201/9781351074186.
Tzin V., Galili G., Aharoni A. eLS. John Wiley & Sons, Ltd: Chichester, 2012. DOI: 10.1002/9780470015902.a0001315.pub2.
Ossipov V., Salminen J.P., Ossipova S., Haukioja E., Pihlaja K. Biochemical Systematics and Ecology, 2003, vol. 31(1), pp. 3–16. DOI: 10.1016/S0305-1978(02)00081-9.
Aksonov A.A., Krol' T.A., Baleyev D.N., Osipov V.I. XI mezhdunarodnogo simpoziuma «Fenol'nyye soyedineniya: fun-damental'nyye i prikladnyye aspekty». [XI International Symposium “Phenolic Compounds: Fundamental and Ap-plied Aspects”]. Moscow, 2022. (in Russ.).
Tahmasebi E.S., Rabiei Z., Vannozzi G.P., Akbari G.A. J. Agr. Sci. Tech., 2011, vol. 13, pp. 943–952.
Sairam R.K., Srivastava G.C. Plant Science, 2002, vol. 162(6), pp. 897–904. DOI: 10.1016/S0168-9452(02)00037-7.
Ossipov V., Bonner C., Ossipova S., Jensen R. Plant Physiology and Biochemistry, 2000, vol. 38(12), pp. 923–928. DOI: 10.1016/S0981-9428(00)01203-1.
Gavrilenko V.F., Ladygina M.Ye., Khandobina L.M. Bol'shoy praktikum po fiziologii rasteniy. [Large workshop on plant physiology]. Moscow, 1975, 392 p. (in Russ.).
Bradford M.M. Analytical biochemistry, 1976, vol. 72(1-2), pp. 248–254. DOI: 10.1016/0003-2697(76)90527-3.
R Core Team. R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria, 2013. URL: http://www.R-project.org/.
RStudio Team. RStudio. PBC, Boston, MA, 2020. URL: http://www.rstudio.com/.
Doucette A., Crowell A. Proteomics Technologies and Applications. IntechOpen, 2019, pp. 23–39. DOI: 10.5772/intechopen.85547.
Hýsková V., Bělonožníková K., Šmeringaiová I., Kavan D., Ingr M., Ryšlavá H. Phytochemistr, 2021, vol. 190, 112881. DOI: 10.1016/j.phytochem.2021.112881.
Ryšlavá H., Doubnerová V., Muller K., Baťková P., Schnablová R., Liberda J., Čeřovská N. Collection of Czechoslo-vak Chemical Communications, 2007, vol. 72(10), pp. 1420–1434. DOI: 10.1135/cccc20071420.
Dixon M., Webb E.C. Advances in Protein chemistry, 1962, vol. 16, pp. 197–219. DOI: 10.1016/S0065-3233(08)60030-3.
Magsumov T., Ziying L., Sedov I. International Journal of Biological Macromolecules, 2020, vol. 160, pp. 880–888. DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2020.05.260.
Fernandes V.N.A., Mangolin C.A., Neves A.F., Sousa Nogueira F.C., Zeni Neto H., Machado M.F.P.S. Advances in Horticultural Science, 2020, vol. 34(2), pp. 233–241.
![](http://journal.asu.ru/public/journals/1/article_12549_cover_ru_RU.jpg)
Copyright (c) 2023 Химия растительного сырья
![Лицензия Creative Commons](http://i.creativecommons.org/l/by/4.0/88x31.png)
Это произведение доступно по лицензии Creative Commons «Attribution» («Атрибуция») 4.0 Всемирная.
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Авторы, которые публикуются в данном журнале, соглашаются со следующими условиями:
1. Авторы сохраняют за собой авторские права на работу и передают журналу право первой публикации вместе с работой, одновременно лицензируя ее на условиях Creative Commons Attribution License, которая позволяет другим распространять данную работу с обязательным указанием авторства данной работы и ссылкой на оригинальную публикацию в этом журнале.
2. Авторы сохраняют право заключать отдельные, дополнительные контрактные соглашения на неэксклюзивное распространение версии работы, опубликованной этим журналом (например, разместить ее в университетском хранилище или опубликовать ее в книге), со ссылкой на оригинальную публикацию в этом журнале.
3. Авторам разрешается размещать их работу в сети Интернет (например, в университетском хранилище или на их персональном веб-сайте) до и во время процесса рассмотрения ее данным журналом, так как это может привести к продуктивному обсуждению, а также к большему количеству ссылок на данную опубликованную работу.