ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА ОСАЖДЕНИЯ БЕЛКА АЦЕТОНОМ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ
УДК 577.151: 577.13
Аннотация
Фенольные соединения растительного происхождения широко используются во многих областях медицины и сельского хозяйства. Изучение механизмов их образования и накопления представляет собой сложную задачу и включает определение активности ключевых ферментов их синтеза, одним из которых является шикиматдегидрогеназа. При этом выделение белков и ферментов из растительного сырья осложнено присутствием фенольных соединений и пигментов. Целью исследования было изучение применимости метода ацетонового осаждения белка из грубых экстрактов листьев облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.) и свидины шелковистой (Cornus sericea L.) для определения активности ферментов на примере шикиматдегидрогеназы. Объектом исследования были листья облепихи крушиновидной (H. rhamnoides) и свидины шелковистой (C. sericea). Выделение белка из грубого экстракта проводили охлажденным ацетоном с различным насыщением и трехкратной отмывкой осадка, после чего он растворялся в буфере. Активность шикиматдегидрогеназы определяли при рН=10.0 и выражали в нкат на мг белка. Были выделены фракции белка с различной активностью шикиматдегидрогеназы из листьев облепихи крушиновидной (H. rhamnoides) и свидины шелковистой (C. sericea). Показано, что фракция белка, полученная при соотношении 1 : 1.5 (экстракт : ацетон, 60% насыщения), наиболее удобна в работе, имеет высокую активность фермента и не содержит окрашенных примесей. Данный способ выделения и предварительной очистки белка является быстрым, требует малого количества образца и подходит для скрининговых исследований активности различных ферментов в лекарственных растениях.
Скачивания
Metrics
Литература
Chalker-Scott L., Fuchigami L.H. Low temperature stress physiology in crops. CRC press, 2018, pp. 67–80. DOI: 10.1201/9781351074186.
Tzin V., Galili G., Aharoni A. eLS. John Wiley & Sons, Ltd: Chichester, 2012. DOI: 10.1002/9780470015902.a0001315.pub2.
Ossipov V., Salminen J.P., Ossipova S., Haukioja E., Pihlaja K. Biochemical Systematics and Ecology, 2003, vol. 31(1), pp. 3–16. DOI: 10.1016/S0305-1978(02)00081-9.
Aksonov A.A., Krol' T.A., Baleyev D.N., Osipov V.I. XI mezhdunarodnogo simpoziuma «Fenol'nyye soyedineniya: fun-damental'nyye i prikladnyye aspekty». [XI International Symposium “Phenolic Compounds: Fundamental and Ap-plied Aspects”]. Moscow, 2022. (in Russ.).
Tahmasebi E.S., Rabiei Z., Vannozzi G.P., Akbari G.A. J. Agr. Sci. Tech., 2011, vol. 13, pp. 943–952.
Sairam R.K., Srivastava G.C. Plant Science, 2002, vol. 162(6), pp. 897–904. DOI: 10.1016/S0168-9452(02)00037-7.
Ossipov V., Bonner C., Ossipova S., Jensen R. Plant Physiology and Biochemistry, 2000, vol. 38(12), pp. 923–928. DOI: 10.1016/S0981-9428(00)01203-1.
Gavrilenko V.F., Ladygina M.Ye., Khandobina L.M. Bol'shoy praktikum po fiziologii rasteniy. [Large workshop on plant physiology]. Moscow, 1975, 392 p. (in Russ.).
Bradford M.M. Analytical biochemistry, 1976, vol. 72(1-2), pp. 248–254. DOI: 10.1016/0003-2697(76)90527-3.
R Core Team. R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria, 2013. URL: http://www.R-project.org/.
RStudio Team. RStudio. PBC, Boston, MA, 2020. URL: http://www.rstudio.com/.
Doucette A., Crowell A. Proteomics Technologies and Applications. IntechOpen, 2019, pp. 23–39. DOI: 10.5772/intechopen.85547.
Hýsková V., Bělonožníková K., Šmeringaiová I., Kavan D., Ingr M., Ryšlavá H. Phytochemistr, 2021, vol. 190, 112881. DOI: 10.1016/j.phytochem.2021.112881.
Ryšlavá H., Doubnerová V., Muller K., Baťková P., Schnablová R., Liberda J., Čeřovská N. Collection of Czechoslo-vak Chemical Communications, 2007, vol. 72(10), pp. 1420–1434. DOI: 10.1135/cccc20071420.
Dixon M., Webb E.C. Advances in Protein chemistry, 1962, vol. 16, pp. 197–219. DOI: 10.1016/S0065-3233(08)60030-3.
Magsumov T., Ziying L., Sedov I. International Journal of Biological Macromolecules, 2020, vol. 160, pp. 880–888. DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2020.05.260.
Fernandes V.N.A., Mangolin C.A., Neves A.F., Sousa Nogueira F.C., Zeni Neto H., Machado M.F.P.S. Advances in Horticultural Science, 2020, vol. 34(2), pp. 233–241.
Copyright (c) 2023 Химия растительного сырья
Это произведение доступно по лицензии Creative Commons «Attribution» («Атрибуция») 4.0 Всемирная.
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Авторы, которые публикуются в данном журнале, соглашаются со следующими условиями:
1. Авторы сохраняют за собой авторские права на работу и передают журналу право первой публикации вместе с работой, одновременно лицензируя ее на условиях Creative Commons Attribution License, которая позволяет другим распространять данную работу с обязательным указанием авторства данной работы и ссылкой на оригинальную публикацию в этом журнале.
2. Авторы сохраняют право заключать отдельные, дополнительные контрактные соглашения на неэксклюзивное распространение версии работы, опубликованной этим журналом (например, разместить ее в университетском хранилище или опубликовать ее в книге), со ссылкой на оригинальную публикацию в этом журнале.
3. Авторам разрешается размещать их работу в сети Интернет (например, в университетском хранилище или на их персональном веб-сайте) до и во время процесса рассмотрения ее данным журналом, так как это может привести к продуктивному обсуждению, а также к большему количеству ссылок на данную опубликованную работу.
